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　　荷花(Ｎｅｌｕｍｂｏｎｕｃｉｆｅｒａ)為睡蓮科蓮屬的宿根水生花卉,是中國的傳統名花和重要的經濟植物。我國荷花品種資源十分豐富,由于花蓮多為自然雜交或人工雜交品種,播種繁殖難以保持原品種性狀,再者花蓮中的許多品種常因雌雄蕊瓣化而不易結實,因此,資源圃荷花品種傳統的繁殖及保存方法主要采用分藕和大面積缸栽或池植[1]。但是,荷花的分藕繁殖系數較低,這個問題現已成為限制荷花種植業發展的主要障礙[2,3]。此外,有些品種因生長勢弱,品種保存十分困難。為了能充分利用品種資源,及時為商業化生產提供大量優良種苗,同時又能為珍貴品種的保存開辟新途徑,我們對一些珍貴荷花品種進行了組織培養試驗,篩選出較為合適的培養基,并獲得了大量荷花組培苗,現將試驗結果報道如下。

　　1材料與方法

　　11供試材料

　　試材取自杭州市園文局靈隱管理處曲院風荷水生植物資源圃,包括廈門碗蓮、白玉、佛手觀音、佛座和貴妃等5個珍貴品種。

　　12外植體處理

　　選取以上品種的冬眠種藕,用水沖去污泥,然后將莖尖連葉鞘一起切下,用2%洗衣粉溶液輕輕刷凈,自來水沖洗30ｍｉｎ后用紗布吸干,剝去外層葉鞘,置于超凈工作臺上。在75%酒精溶液中浸泡1ｍｉｎ,然后用01%升汞消毒10～12ｍｉｎ,消毒后無菌水沖4～5遍,再剝去內層葉鞘,接入培養基[4]。

　　13培養基

　　試驗中ＭＳ培養基為基本培養基,含瓊脂5ｇＬ,ｐＨ值58。在ＭＳ培養基中分別加入赤霉素ＧＡ02ｍｇＬ和不同濃度的細胞分裂素ＢＡ(02～08ｍｇＬ),培養一段時間后,觀察不同激素水平對誘芽的影響。待幼葉長出后轉入增殖培養基,在ＭＳ培養基中添加不同濃度的ＢＡ(02～10ｍｇＬ)、ＧＡ(0～05ｍｇＬ)和生長素ＩＢＡ(0～05ｍｇＬ),觀察不同激素水平對增殖的影響。在相同激素水平的情況下,用固體(加瓊脂5ｇＬ)和液體2種培養基進行增殖培養。若干天后,觀察兩者的增殖結果。將經增殖培養后帶有莖段的小苗轉入添加ＩＢＡ(0～18ｍｇＬ)或生長素ＮＡＡ(0～14ｍｇＬ)的生根培養基中,觀察不同激素對生根的影響。培養室恒溫為25℃,光照強度為2000ｌｘ,每天光照14ｈ。

　　14移栽煉苗

　　將試管苗分別栽入營養液(Ｋ∶Ｎ∶Ｐ∶Ｍｇ∶Ｃａ=22∶13∶1∶1∶3)、黃沙、西湖淤泥(西湖淤泥∶泥炭∶基肥=8∶2∶2)等基質中,黃沙和西湖淤泥經高溫滅菌,使用時加營養液呈稀糊狀,調查試管苗的成活率。

　　2結果與分析

　　21不同激素水平對誘芽率的影響

　　經20ｄ培養后結果(表1)可見,各參試荷花品種芽的誘導率均以采用ＭＳ+ＢＡ04(ＢＡ04表示加入ＢＡ04ｍｇＬ,下同)+ＧＡ02誘導培養基時最高。5個品種中,貴妃誘導率較低,僅10%～55%。而另4個品種,采用ＭＳ+ＢＡ04+ＧＡ02誘導培養基時,誘導率均在80%～90%。ＭＳ+ＢＡ02+ＧＡ02處理的誘導率雖然也比較高,但芽細小,葉柄細長,生長勢弱。ＭＳ+ＢＡ08+ＧＡ02誘導培養基發出的芽比較粗壯,葉柄短,葉片卷曲、較厚,但誘導率較低,大約14ｄ以后有幼葉長出。試驗結果可見,ＢＡ濃度高于04ｍｇＬ,達到08ｍｇＬ時,荷花的芽誘導受到了抑制,故誘導培養基以ＭＳ+ＢＡ04+ＧＡ02為好。

　　22不同激素水平對增殖的影響

　　將已發芽并帶幼葉的小苗轉入不同激素、不同濃度的培養基中培養25ｄ后,發現廈門碗蓮、白玉、佛手觀音和佛座等4個品種的大多數小苗能發出1～3個新芽,部分小苗還能長出莖段,貴妃芽的增殖頻率、芽的平均增殖系數和發出莖段的頻率明顯低于其它4個品種(表2,3,4)。

　　當在添加了ＢＡ08ｍｇＬ的ＭＳ培養基中再添加ＧＡ05ｍｇＬ或ＩＢＡ05ｍｇＬ時,除貴妃外,其它4個品種的芽增殖頻率均在70%～90%。但該2組處理的莖段增殖頻率相差很大,添加ＧＡ05ｍｇＬ的處理除貴妃外,均在55%以上;而添加ＩＢＡ05ｍｇＬ的處理則都在0～10%。由此可見,ＢＡ無論和ＧＡ合用,還是和ＩＢＡ合用,芽的增殖頻率相差不多,但ＧＡ可明顯促進莖段的發生。試驗結果還可以看出,隨著ＢＡ濃度由低到高,芽的增殖頻率也呈現由低到高的趨勢。至ＢＡ08ｍｇＬ時增殖率最高,而當ＢＡ濃度達到10ｍｇＬ時,荷花莖段的發生則受到了抑制。從以上結果可見,荷花的增殖培養基以ＭＳ+ＢＡ08+ＧＡ05較合適。

　　23固體和液體培養基對增殖的影響

　　用ＭＳ+ＢＡ08+ＧＡ05固體和液體2種培養基同時繼代10ｄ,都能發出新芽。繼代25ｄ后,兩者的增殖頻率差別不大(表5),液體培養基的平均增殖系數略低,但植株健壯,且不干枯;而固體培養基內會出現葉片及葉柄干枯的情況,且植株細弱。在實際操作中,兩者交替使用,可達到好的效果。

　　24不同激素水平對生根的影響

　　增殖培養25～30ｄ,將帶有莖段的小苗轉入生根培養基培養20ｄ后可見,不同激素水平的對荷花根的促生作用有很大區別(表6),個別小苗在第7ｄ有根長出,多數在20ｄ后長根。當ＩＢＡ濃度分別為06ｍｇＬ、10ｍｇＬ和14ｍｇＬ時,生根率呈現從低到高的趨勢;當ＩＢＡ濃度達到18ｍｇＬ時,生根率下降。試驗結果可見,添加ＮＡＡ各處理的生根率都很小。ＬＳＤ法測定結果顯示,試驗處理中,以ＭＳ+ＩＢＡ14的生根率最高,均在55%以上,最高可達833%。

　　25試管苗的移栽

　　在移栽試驗中我們發現,將已長根的小苗從瓶中輕輕移出后,須在自來水中放置2～3ｄ(每天換水),再植入備好的基質中,小苗栽植深度以2ｃｍ為宜,移栽14ｄ以后長出新根,30ｄ后發出新芽,此時,可逐漸提高水位。在營養液、黃沙及西湖淤泥等3種移栽基質中,黃沙和營養液荷花試管苗成活率分別為556%和455%,以西湖淤泥的成活率最高,達到727%。

　　3小結與討論

　　誘芽培養基以選用ＭＳ+ＢＡ04ｍｇＬ+ＧＡ02ｍｇＬ最為理想,既能獲得較高的誘導率,又能保證荷花生長健壯。增殖培養時,在ＭＳ培養基中添加ＢＡ08ｍｇＬ或ＢＡ10ｍｇＬ與ＧＡ配合使用,能獲得較高的增殖率,但連續繼代2次以上,會出現畸型苗,如果和ＢＡ04ｍｇＬ+ＧＡ02ｍｇＬ交替使用,能最大程度地避免這種情況發生。與此同時,還應將固體培養基和液體培養基交替使用,這樣才能得到多而健壯的小苗。在生根培養中,ＩＢＡ的促生根作用明顯優于ＮＡＡ。當2種激素的濃度同為14ｍｇＬ時,ＩＢＡ最高生根率能達到833%,而ＮＡＡ只有133%,所以,荷花生根培養用ＩＢＡ效果較好。廈門碗蓮、白玉、佛手觀音和佛座等4個品種,在整個離體培養過程中生長情況區別不大,只有貴妃的誘芽率、增殖率和生根率都較低,這說明不同品種材料的異質性,應考慮調整培養基的激素水平[5]。試管苗出瓶后,先要在自來水中放置2～3ｄ洗凈培養基質,再移入經消毒過的西湖淤泥,成活率可達727%。